期刊简介
本刊是反映多学科科研、医疗及教学的理论性学术刊物。主要刊载专家述评、基础医学、临床医学、综述、病例报告、医学教育等方面的文章。本刊为中国科技论文统计源期刊所引证。
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首页>大连医科大学学报杂志
- 杂志名称：大连医科大学学报杂志
- 主管单位：辽宁省教育厅
- 主办单位：大连医科大学
- 国际刊号：1671-7295
- 国内刊号：21-1369/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：Caj-cd规范获奖期刊期刊收录：剑桥科学文摘, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 哥白尼索引(波兰), 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 文摘与引文数据库, 知网收录(中), 万方收录(中), 维普收录(中), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏
β-葡萄糖醛酸苷酶的重组表达及对黄芩苷的生物转化
周琪；窦同意；丁乐乐；曲明佳；翁仔淼；吴大畅；侯洁
关键词：黄芩素, 酶解, 黄芩苷, β-葡萄糖醛酸苷酶
摘要：目的 构建表达β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,GUS)的重组菌株,得到高纯度β-葡萄糖醛酸酶,进而对黄芩苷进行生物转化获得黄芩素.方法 以E.coli K12基因组DNA为模板,采用PCR方法 扩增GUS基因,经酶切后连接到表达载体pET-28a中,获得重组表达载体pET28a-GUS,将重组载体转化到感受态细胞BL21(DE3)中,对所得基因工程菌进行培养条件和表达条件的优化;后经分离纯化后得到高纯度β-葡萄糖醛酸酶.以黄芩苷为底物进行酶法转化生产黄芩素,并对反应条件进行优化.结果 经测序,扩增的重组质粒目的基因序列与数据库中GUS基因序列一致.经IPTG(isopropy-β-D-thiogalactoside)诱导表达后, SDS-PAGE分析获得分子质量70 kDa的单一蛋白条带,工程菌适培养条件为: 37 ℃、pH7.2、IPTG浓度0.6 μmol/L、诱导时间12 h.经过离心破碎、亲和层析、冻干后得到高纯度β-葡萄糖醛酸酶冻干粉.在该酶催化转化下,黄芩苷可转化为黄芩素,在40 ℃,pH 6.5,酶浓度60 μg/mL条件下,反应2.5 h,黄芩苷转化率可达72.5%.结论 成功构建了β-葡萄糖醛酸苷酶高表达菌株,并用于黄芩苷的定向水解制备黄芩素,为生物转化法生产黄芩素提供了新思路.
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